La clorofil·la és un pigment verd que es troba a les plantes superiors i a la resta d'organismes fotosintètics. La clorofil·la A i la clorofil·la B són solubles en etanol, èter i acetona i altres dissolvents, insolubles en aigua i èter de petroli, per tant, poden utilitzar dissolvents polars com acetona, metanol, etanol, acetat d'etil i així successivament per extreure la clorofil·la.
Procés d'extracció de la clorofil·la:
L'extracció de clorofil·la es prepara en una habitació semifosca a 25 graus C. Els passos d'extracció són els següents:
(1) Agafeu 1000 grams de fulles verdes fresques i tritureu-les en un Wechsler.
(2) Poseu els 1000 grams de fulles verdes triturades en acetona amb una petita quantitat de carbonat de calci (temperatura de 20 graus) per a l'extracció, fins que els fragments de fulles siguin incolors després de filtrar-los i netejar-los.
(3) Col·loqueu l'extracte d'acetona filtrat en un embut que conté 1 litre d'èter de petroli i 100 ml d'acetona, i després feu girar suaument tot afegint aigua destil·lada fins que s'estratifiqui. La majoria de l'acetona i les impureses solubles en aigua de la capa d'aigua es descarten, deixant només una solució d'èter de petroli.
(4) Després de tornar a purificar la solució d'èter de petroli amb aigua destil·lada, es neteja més de 5 vegades amb una solució de metanol al 200 ml al 80% que conté èter de petroli i 0,01 g d'àcid oxàlic i, finalment, s'obté una suspensió de color groc verd. .
(5) Assecar la suspensió amb sulfat de sodi anhidre i infiltrar-la en una columna feta de sacarosa en pols de 3 cm de gruix. A continuació, netejar els pigments precipitats per eliminar els carotenoides i fer que només continguin clorofil·la natural.
(6) La columna de sacarosa que conté clorofil·la natural es divideix en dues capes, la capa verda té una capa de clorofil·la B de 4-10 mm, l'altra capa blava és una capa de clorofil·la A de 2-6 mm.
(7) La part situada al mig de la capa blava (aproximadament la meitat de la capa blava) es posa en èter, la suspensió es filtra i s'extreu, es neteja amb aigua destil·lada, s'asseca amb sulfat de sodi i es filtra amb utensilis per obtenir clorofil·la. A.
(8) Traieu la part mitjana de la capa verda a (6) i poseu-la ràpidament a l'èter per filtrar-la i rentar-la per fer una solució d'èter de clorofil·la B.
Com separar-se durant l'extracció?
La cromatografia és un mètode important per a la separació, purificació i identificació de compostos orgànics, especialment en la microanàlisi s'utilitza àmpliament. Els pigments de fruites i verdures inclouen principalment carotè liposoluble, luteïna, clorofil·la i antocianina soluble en aigua. En els experiments d'extracció, podem utilitzar el principi de filtració d'antocianes solubles en aigua de miscibilitat similar, que al seu torn pot fer ús de cromatografia de capa fina, cromatografia en columna, cromatografia líquida d'alt rendiment (HPLC) per a la separació de betacarotè, luteïna. i la clorofil·la, debilitat a causa de la polaritat dels tres tipus de pigment al seu torn, es pot triar adequadament un sol dissolvent orgànic o una relació diferent de dissolvent mixt com a agent d'expansió i agent d'elució, es van determinar les condicions òptimes de separació.
